外泌体研究一站式解决方案
什么是外泌体?
外泌体是由细胞渗透的直径为30~150nm的小囊泡,内含泉源于细胞相关的卵白质与核苷酸等生物分子,在细胞交流间起主要作用。具有镌汰细胞凋亡、减轻炎症反映、促进血管天生、抑制纤维化、提高组织修复潜力等主要生物学功效。其具有以下特征:
外泌体有哪些功效?
外泌体携带大量特异性的卵白质(如细胞因子、生长因子)以及功效性的mRNA、miRNA等生物活性物质,在体内加入免疫应答、抗原提呈、细胞迁徙、细胞分化、肿瘤侵袭、促血管新生等心理历程,与多种疾病的发生和历程亲近相关。由于外泌体的特殊结构和功效,使得它具有潜在的应用价值,一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标,另一方面也可以作为治疗手段,未来有可能作为药物的自然载体用于临床治疗。
怎样疏散外泌体?
外泌体的样原泉源主要有细胞作育上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等,其中细胞作育上清、血清/血浆、尿液是最常见的泉源。若是是使用细胞作育上清,要注重细胞作育中一定不能添加FBS。
外泌体疏散要领有许多种,包罗超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。可是这么多要领中,MRCAT猫先生体育通常推荐选用超速离心法举行提取和疏散,由于超速离心要领获得的外泌体不管是从得率照旧纯度上都较量好。其他要领的特点如下:
1、过滤离心:得率较量低。
2、密度梯度离心:步骤繁琐,得率较低。
3、免疫磁珠:特异衴uan冉细撸寐式系。
4、商用试剂盒:价钱高,效果一ban。疏散出的外泌体电镜和粒径效果差。
综合以上,超速离心法是现在价钱适中、得率和纯度都能兼得的一种要领。
怎样判断外泌体?
外泌体判断是进一步研究外泌体功效和机制的事情基础。现在的判断要领主要包罗透射电子显微镜(TEM)举行形态学视察、纳米颗粒追踪剖析(NTA)举行粒径和密度剖析、用WB举行卵白标志物的判断。WB判断包罗CD63、CD9、CD81、TSG101、Hsp70、syntenin1等。
透射电镜图
纳米颗粒追踪剖析
WB
怎样研究外泌体?
外泌体的研究偏向主要包罗以下三个方面:
1、寻找疾病诊断和预后的分子标志物。
2、展现疾病发病机制,从微情形角度诠释细胞之间通讯促进疾病发生的缘故原由。
3、外泌体作为药物载体,实现靶向给药。
针对寻找分子标志物,通常的研究思绪如下:
针对疾病研究,常见的研究思绪如下(以外泌体miRNA为例):
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